Дифференциальная диагностика меланомы, иммуногистохимическое (ИГХ) исследование контейнер Histopot с биоматериалом в растворе формалина

Метод определения

Гистологическое исследование биоптата кожи (опухолевого очага) (окрашивание гематоксилин-эозином) с морфологической оценкой опухоли согласно гистологической классификации ВОЗ, оценкой глубины инвазии по шкале Кларка и Бреслоу.

Иммуногистохимическое исследование с применением антител к протеину S-100, Melan A, HMB-45, SOX-10 (пероксидазный и авидин-биотиновый методы).

Исследуемый материал Биоптат кожи (опухолевого очага), фиксированный в забуференном 10% растворе формалина

Согласно требованиям п. 17 Правил проведения патолого-анатомических исследований, утв. Приказом Минздрава России от 24.03.2016 № 179н, в целях уточнения диагноза заболевания (состояния) с учетом требований стандартов медицинской помощи и клинических рекомендаций (протоколов лечения) по вопросам оказания медицинской помощи на этапе микроскопии биопсийного (операционного) материала врачом-патологоанатомом дополнительно может быть назначено проведение:

дополнительных методов окраски микропрепаратов (постановки реакции, определения) - гистохимических, иммуногистохимических, электронно-микроскопических, молекулярно-биологических, генетических и иных методов;
дополнительных методов микроскопии - поляризационной, флуоресцентной, трансмиссионной или сканирующей электронной и иных методов.

Применение вышеуказанных методов исследования, назначенных врачом-патологоанатомом при проведении исследования в целях уточнения диагноза заболевания (состояния), подлежит дополнительной оплате по стоимости, указанной в утвержденном прайс-листе медицинского центра ИНВИТРО

Меланоцитарные опухоли кожи представляют собой гетерогенную группу доброкачественных и злокачественных новообразований со специфическими клиническими, морфологическими и генетическими признаками. Клинически и с точки зрения здравоохранения, злокачественные меланомы являются значимой группой злокачественных опухолей кожи в связи с высокой тенденцией к лимфогенному и гематогенному метастазированию. Частота меланом составляет 1,8-2,2 на 100 тыс. населения и 1% от числа всех злокачественных новообразований. Меланомы возникают у женщин гораздо чаще, чем у мужчин.

В 50-е и 60-е годы ХХ века считалось, что при обнаружении меланомы пациент имеет плохой прогноз, но с середины 1970-х годов выживаемость при этом заболевании в развитых странах значительно возросла. Это связано не только с ранней диагностикой, но и с программой Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) по первичной и вторичной профилактике заболевания.

Преимущественной локализацией меланомы у женщин являются нижние конечности (голень), у мужчин – туловище (чаще спина); у лиц обоих полов старшей возрастной группы (65 лет и старше) меланома локализуется преимущественно на коже лица. В значительном большинстве случаев (примерно у 70% пациентов) меланома развивается на месте врожденных или приобретенных невусов, и только у 28-30% – на неизмененной коже (melanoma cutis de novo).

При подозрении на меланому обязательно проводят биопсию пораженного очага с последующим гистологическим исследованием, оценкой краев резекции опухоли. Определяющим в диагностике является морфологическое исследование удаленного очага с последующим иммуногистохимическим исследованием.

В дифференциальной диагностике меланомы принято использовать ИГХ исследование биоптатов для оценки экспрессии панели маркеров, которые в комплексном применении обеспечивают максимальную чувствительность и специфичность иммуноморфологического исследования. Такой комплекс маркеров чаще включает протеин S-100, Melan А (MART-1), HMB-45, SOX-10, а также некоторые другие.

Протеин S-100 впервые был идентифицирован в 1965 г. B.W. Moore и получил свое название благодаря растворимости в 100% насыщенном растворе сульфата аммония. Относится к группе кальций связывающих белков с молекулярной массой 21 кДа, которые участвуют в клеточном цикле, дифференцировке, в процессах взаимодействия цитоскелета с мембраной, выполняют как внутриклеточные, так и внеклеточные функции. Экспрессируется шванновскими клетками периферической нервной системы, гистиоцитами с антиген-презентирующей функцией типа клеток Лангерганса, адипоцитами, хондроцитами, меланоцитами, миоэпителиальными клетками, клетками мозгового вещества надпочечников, фолликулярными дендритными клетками. Протеин S-100 локализуется в клеточной мембране, цитоплазме, ядре. С диагностической точки зрения, белок S-100 рассматривается как чувствительный, но неспецифический маркер меланоцитов (может выявляться в клетках других опухолей: липосарком, хондросарком, шванном и пр.), в дифференциальной диагностике экспрессия протеина S-100 используется в панели с другими маркерами меланомы. Ген Меlan A/MART-1 (Melanoma Antigen Recognized by T-cells 1) кодирует белок с молекулярной массой 20-22 кДа, связанный с эндоплазматическим ретикулумом и премеланосомами, распознаваемый Т-лимфоцитами. Гликопротеин Меlan A/MART-1 локализуется на внутренней мембране премеланосом 1, 2, 3-го типов. Меlan A/MART-1 является более специфичным маркером, чем белок S-100, поэтому его включают в стандартную панель для типирования меланом.

HMB-45 (Melanosome) – специфический меланосомный антиген (Melanosome Specific Antigen, MSA), который взаимодействует с чувствительной к нейроаминидазе олигосахаридной боковой цепью гликоконъюгата. Кодирует белок GP100 с молекулярной массой 10 кДа, который локализуется на внутренней мембране премеланосом 1, 2, 3-го типов, обнаруженный моноклональным антителом HMB-45. Он является высокоспецифичным маркером меланоцитарной дифференцировки, однако HMB-45 менее чувствителен, чем Меlan A.

SOX-10 (member of the sex-determining region Y-related HMG-box family) – белок, кодируемый геном на 22-й хромосоме (22q13.1), является ядерно-транскрипционным фактором, участвующим в регуляции миграции клеток нервного гребня на этапах эмбриогенеза, в дифференцировке клеток меланоцитарной линии. Экспрессия ядерного белка SOX-10 сохраняется в клетках с признаками глиальной и шванновской дифференцировки, миоэпителиальных клетках слюнных, бронхиальных, эккриновых и молочных желез, а также наблюдается в тучных клетках различных тканей и органов, как в ядре, так и в цитоплазме. Исследованиями последних лет показано, что SOX-10 является более специфичным и чувствительным маркером меланом обычного, веретенообразного и десмопластического подтипов по сравнению с протеином S-100. Рутинно используемые маркеры меланомы HMB-45 и Меlan A/MART-1 в десмопластической меланоме выявляются в 10% случаев, в то время как чувствительность и специфичность SOX-10 для определения десмопластической меланомы составляет до 98%.

В ряде случаев дополнительно проводится определение экспрессии следующих маркеров:

MiTF (Microphthalmia-associated Transcription Factor) – известного, как основной белок класса E спирали петли спирали 32 или bHLHe32, кодируемый геном MITF. Член семейства транскрипционных факторов микрофтальмии, регулирующих гены, которые кодируют ферменты меланогенеза. Является ведущим регуляторным меланоцитарным ядерным белком, регулирующим экспрессию белков: тирозиназы и связанного с тирозиназой белка TYRP1 (Tyrosinase-related protein 1), а также MART-1, GP-100. Высокая экспрессия MiTF наблюдается в 81-100% меланом, однако экспрессия часто отрицательна в вариантах из десмопластических и веретенообразных клеток.

PNL2 (Melanoma Associated Antigen) – белок, присутствующий в цитоплазме активированных меланоцитов и меланоцитарных опухолей. Антитела к PNL2 обладают высокой чувствительностью для выявления метастатической меланомы (87%), в отличие от антител к НМВ-45 (76%) и антител к MART-1 (82%). Используется для выявления внутриэпидермальных невусов, в то время как дермальный компонент сложных невусов не реагирует с антителами к PNL2.

Литература

Ахмедова А.А., Шихлярова А.И., Шейко Е.А., Сустретов В.А. Меланома: Некоторые современные аспекты развития и диагностики. Современные проблемы науки и образования. 2017;5;181. http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=27024
Гилязутдинов И.А., Хасанов Р.Ш., Сафин И.Р., Моисеев В.Н. Злокачественные опухоли мягких тканей и меланома кожи. - М.: Изд. «Практическая Медицина». 2010:204.
Клинические рекомендации. Меланома кожи. Ассоциация онкологов России. Ассоциация специалистов по проблемам меланомы. 2017:77. http://oncology-association.ru/docs/melanoma_kozhi_2017.pdf
Лезвинская Е.М., Вавилов А.М. Лимфопролиферативные опухоли кожи. - СПб.: Изд. «Практическая Медицина». 2010:368.
Новик А.В. Практическая онкология. 2011;12(1):185.
Червонная Л.В. Пигментные опухоли кожи. - СПб.: Изд. «ГЭОТАР-Медиа». 2014:224.
Bloethner S., Scherer D., Drechsel M. et al. Malignant melanoma – a genetic overview. Actas dermo-sifiliográficas. 2009;100(1):3851.
Hersey P., Smalley K.S., Weeraratna A. et al. Meeting report from the 7th International Melanoma Congress, Sydney, November, 2010. Pigment cell and melanoma research. 2011;24(1):15.
Hoek K.S., Goding C.R. Cancer stem cells versus phenotypeswitching in melanoma. Pigment cell and melanoma research. 2010;23(6):746759.
Kyrgidis A., Tzellos T.G., Triaridis S. Melanoma: Stem cells, sun exposure and hallmarks for carcinogenesis, molecular concepts and future clinical implications. Journal of carcinogenesis. 2010;9(3):115.
Mueller D.W., Bosserhoff A.K. Role of miRNAs in the progression of malignant melanoma. British journal of cancer. 2009;101(4):551556.
Palmieri G., Capone M., Ascierto M.L. et al. Main roads to melanoma. Journal of translational medicine. 2009;7(86):16.
Spatz A., Stock N., Batist G. et al. The biology of melanoma prognostic factors. Discov. Med. 2010;10(50.):87.
Dabbs D.J. Diagnostic Immunohistochemistry: Theranostic and Genomic Applications. Elsevier, 4-th Edition. 2013:960.