Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi (sensu lato), исследование методом Вестерн-блот (anti-Borrelia IgG, Western blot)

Бактерии, относящиеся к совокупности видов Borrelia burgdorferi sensu lato, являются возбудителями болезни Лайма (бореллиоза) у человека. Это заболевание относится к числу наиболее распространенных в России природно-очаговых инфекций с трансмиссивным путем передачи. Сегодня во всем мире известно более десяти видов Borrelia burgdorferi sensu lato, в том числе девять, строго связанных с Евразией (B. afzelii, B. garinii, B. japonica, B. lusitaniae, B. spielmanii, B. sinica, B. tanukii, B. turdi и B. valaisiana), три вида ассоциируется только с США (B. andersonii, B. californiensis и B. carolinensis).

Возбудитель Borrelia burgdorferi попадает в организм человека с укусом инфицированного клеща. Инкубационный период заболевания после инфицирования составляет 1-2 недели. В течение болезни Лайма выделяют стадии ранней (локальной и диссеминированной) и поздней инфекции. В месте проникновения возбудителя появляется мигрирующая эритема (порой это единственное проявление ранней стадии), которая держится около месяца. К сожалению, у 20-45% больных возможна безэритемная форма заболевания. Далее у 10-15% пациентов при диссеминации развиваются признаки поражения нервной системы (менингит, менингополирадикулоневрит, периферический паралич лицевого нерва) и/или сердечно-сосудистой системы, опорно-двигательного аппарата (у 60% пациентов). Поздняя стадия формируется на протяжении первых двух лет от начала заболевания, клинически характеризуется общей слабостью, поражением суставов и нервной системы. Патогномоничным поражением кожи является хронический атрофический акродерматит.
 
Клинические и лабораторные особенности, выявленные у больных с признаками персистенции боррелиозной инфекции (например, обнаружение ревматоидного фактора в крови), свидетельствуют о возможности аутоиммунных процессов, развивающихся в результате молекулярной мимикрии между эпитопами антигенов боррелии и тканями хозяина и обусловливающих варианты болезни Лайма, резистентные к лечению антибиотиками.

Диагностика болезни Лайма основывается на серологических (ИФА, иммуноблот) и молекулярно-генетических (ПЦР) методах анализа. Совершенствование серологического метода для диагностики боррелиоза позволило в последнее время в большинстве стран мира перейти от принципа трехшагового лабораторного подтверждения диагноза на двухшаговый – ИФА, иммуноблоттинг.

Отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях инфекции не является подтверждением ее отсутствия и требует перепроверки в динамике через 2-4 недели. Обнаружение антител класса IgM и дальнейшее появление IgG-антител является диагностическим критерием течения боррелиоза. На диссеминированной и хронической стадиях специфические антитела к возбудителю класса IgG присутствуют практически всегда. Антитела класса IgG циркулируют в крови длительный срок (от нескольких месяцев до нескольких лет) даже после успешной антимикробной терапии и излечения болезни. Поэтому по присутствию и титру антител об успехе лечения судить нельзя. Иммунитет к Borrelia burgdorferi носит нестерильный характер. У переболевших людей возможно повторное заражение через несколько лет. Выявление антител к Borrelia burgdorferi не всегда сопровождается клиническими признаками болезни Лайма. Поэтому, согласно принципу двухшагового лабораторного подтверждения данного диагноза, положительные результаты, полученные методом ИФА, обязательно должны подтверждаться другим методом.

Для исключения ложноположительных результатов ИФА, подтверждения диагноза, дифференцированной диагностики, мониторинга заболевания рекомендуется использовать метод иммуноблота, который позволяет раздельно определять IgM и IgG к отдельным белкам боррелии. Для быстрой интерпретации дифференциально-диагностическое значение имеет выявление IgM: OspC и IgG: VlsE (Variable major protein-like sequence, Expressed). Для референс-исследований наряду с этими белками имеет значение определение и других специфических антигенов. 

Состав используемых для выявления антител к Borrelia специфических антигенов

Источником антигенов для тестов Anti-Borrelia EUROLINE-WB является специально подобранный штамм Borrelia afzelii. Тестовый набор содержит тестовые стрипы с электрофоретически разделенными экстрактами, содержащими антигены Borrelia afzelii и мембранный чип с рекомбинантным антигеном VlsE (экспрессированная основная вариабельная белковоподобная последовательность).

Специальной подготовки не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

Формат выдачи результата исследования качественный (описание наличия/отсутствия полос, характеризующих выявление антител к каждому из указанных антигенов, в форме «положительно», «слабоположительно» или «отрицательно»; общее заключение о результате исследования в форме «положительный»/«отрицательный»). 

При общей оценке результата учитывают положение окрашенных полос (специфичность антигена) и интенсивность их окрашивания (поскольку иногда возможна неспецифическая слабая ложная реакция с отдельными антигенами). 

Отрицательный: отсутствуют полосы специфических антигенов; наличие одной слабой или четкой полосы специфического антигена: р83, p39, p31, p30, OspC (p25), p21, p19, p17; наличие слабой полосы специфичного антигена VlsЕ. 

Положительный: положительная полоса антигена VlsE; наличие полосы VlsE слабой интенсивности и четкой полосы другого специфического антигена; наличие двух и более полос специфических антигенов. 

Дополнительную информацию по клинической значимости и интерпретации результатов исследования «Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi, выявляемые методом иммуноблоттинга (anti-Borrelia burgdorferi IgG, Immunoblot)» см. в тесте №243 Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi.