Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, и приводимая ниже информация носит исключительно справочный характер.
Иммуноферментный анализ: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов.
Иммуноферментный анализ (ИФА, англ. Enzyme immunoassay, EIA) –лабораторный метод определения различных соединений (макромолекул, вирусов и пр.), в основе которого лежит реакция антиген-антитело.
Генетически чужеродные вещества, попадая в организм человека, вызывают специфические процессы, направленные на удаление этих веществ. Система организма, выполняющая данную функцию, называется иммунной системой, а сами процессы – иммунологическими.
Иммунная система представляет собой совокупность лимфоидных органов, которые функционируют согласованно за счет миграции лимфоцитов из крови в ткани и из ткани в кровь, медиаторов (посредников) и других факторов.
В- и Т-лимфоцитыИммунная система слагается из центральных и периферических органов. К центральным относят тимус и костный мозг. В них лимфоциты дифференцируются (созревают) до стадии функционально активной клетки. К периферическим органам иммунной системы принадлежат лимфатические узлы, селезенка, лимфоидные структуры пищеварительного тракта, аппендикс, миндалины. В этих органах лимфоциты контактируют с антигеном, взаимодействуют между собой и с другими элементами иммунной системы.
Практически все периферические органы иммунной системы являются фильтрами или барьерами для распознавания, захвата и расщепления антигена.
Антиген (англ. antigen от antibody-generator — «производитель антител») - любое вещество, несущее признаки генетически чужеродной информации, которое организм рассматривает как чужеродное или потенциально опасное и против которого начинает вырабатывать антитела (иммунный ответ).Способность антигенов вызывать иммунный ответ называется иммуногенностью, а способность образовывать комплексы с антителами – антигенностью.
К антигенам относятся белки, полисахариды, нуклеиновые кислоты, в том числе и в составе компонентов различных биологических структур (клеток, тканей, вирусов и т.д.).
Антитела (англ. antibody) – это специальные белки иммуноглобулины (Ig), которые вырабатывает иммунная система в ответ на попадание любого чужеродного агента в организм для борьбы с ним.
Антитела обладают способностью образовывать прочные комплексы с антигенами для последующего удаления их из организма.
Иммуноглобулины (Ig) по своей химической структуре относятся к гликопротеидам (белкам, содержащим в своей структуре олигосахариды). По своим свойствам и структурным особенностям иммуноглобулины подразделяются на пять основных классов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM.
В организме антитела вырабатываются клетками крови - В-лимфоцитами. На своей поверхности эти клетки имеют рецепторы, с помощью которых они могут узнавать чужеродный антиген.Антиген, встречаясь в кровотоке с соответствующим ему рецептором В-лимфоцита, активирует его. В-лимфоцит многократно делится и образует клон плазматических клеток. Каждый клон клеток секретирует однородные по своей структуре антитела.
Показания к проведению иммунологического обследования:
Острые и хронические бактериальные, вирусные и паразитарные инфекции (болезнь Боткина, сепсис, пневмония, лейшманиоз, туберкулез, лепра и др.), подозрение на СПИД.
Аутоиммунные заболевания (ревматическая болезнь, ревматоидный артрит, системная красная волчанка и др.).
Аллергические заболевания (бронхиальная астма, поллиноз и др.).
Злокачественные заболевания (лейкозы, лимфогрануломатоз и др.).
Кожно-венерические заболевания (контактный дерматит, пузырчатка, микоз, сифилис и др.).
Патология беременности.
Контроль цитостатической, иммунодепрессивной и иммуностимулирующей терапии.
Обследование пациентов до и после трансплантации.
Первичные иммунодефицитные состояния и др.
Постановка иммунологического диагноза складывается из следующих этапов:
- Сбор иммунологического анамнеза.
- Выявление клинических проявлений иммунопатологии.
- Иммунологические методы исследования.
В иммуноферментном анализе применяют ферменты, которые могут связывать антитела или антигены, меняют окраску специального хромогенного субстрата при взаимодействии с ним и могут быть зарегистрированы физико-химическим методом (методом спектрофотометрии, флуориметрическим, люминисцентным и др.).
На настоящий момент имеются усилительные системы, позволяющие регистрировать наличие всего нескольких сотен молекул ферментов в 1 мл раствора.
Фермент – это сложное органическое вещество, вырабатываемое живой клеткой, способствующее различным химическим реакциям, происходящим в организме.Хромогенный субстрат – это вещество белковой природы, приобретающее определенную окраску после расщепления специфическим протеолитическим ферментом.
Фотометрический анализ - метод качественного и количественного анализа, основанный на избирательном поглощении инфракрасного, видимого или ультрафиолетового излучения молекулами определяемого компонента или его соединения с соответствующим реагентом.
При проведении иммуноферментного анализа в качестве твердой фазы используется поверхность лунок полистиролового планшета, на которую адсорбированы входящие в состав тест-системы известные антитела (против определяемого антигена).
В лунку вносят исследуемую сыворотку крови. При наличии искомого антигена он соединяется с антителом, и образуются комплексы. Лунки промывают и удаляют не связавшиеся компоненты. В лунки вносят антитела к искомому антигену, меченые ферментом. Меченые антитела присоединяются к предыдущему комплексу и также остаются на стенках. Затем в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат (перекись водорода) и хромоген (ортофенилендиамин). Если в исследуемой жидкости был антиген, фермент взаимодействует с перекисью водорода и разлагает его. Выделившийся при этом кислород окрашивает хромоген в желтый цвет. По интенсивности окрашивания, возникающего в результате реакции фермента и субстрата, можно судить о количестве антигенов.
По аналогичной схеме работают тест-системы для определения антител, но в качестве иммуносорбента в них используются антиген, а раствор, который добавляют, содержит раствор антигенов, меченых ферментом.
В клинической диагностике с помощью фиксированных на твердой фазе антител (антигенов), определяют присутствие антигенов микроорганизмов, антител к ДНК, иммунных комплексов, антигенов раковых клеток, антител к различным видам бактерий, вирусов, простейших.
Метод ИФА может применяться для диагностики:
- Вирусных заболеваний:
- ВИЧ-инфекции;
- вирусных гепатитов;
- цитомегаловирусной инфекции;
- вируса Эпштейн-Барр;
- герпетической инфекции;
- коронавирусной болезни.
- Для диагностики инфекций, передающихся половым путем:
- сифилиса;
- хламидиоза;
- трихомониаза;
- гонореи;
- уреаплазмоза.
- Уровня гормонов в эндокринологии.
- Аутоантител и маркеров онкологических заболеваний в онкологии.
- Общего IgE и специфических IgE антител в аллергологии.
- Лекарственных препаратов, наркотиков в биологических образцах.
- Белков сыворотки крови (ферритина, фибронектина и др.).
Подготовка к процедуре
Взятие пробы для лабораторного исследования методом ИФА должно проводиться:
- желательно с 7 до 9 часов утра;
- натощак, т.е. через 8-12 часов после последнего приема пищи;
- после воздержания от алкоголя не менее 24 часов;
- до проведения диагностических и лечебных процедур;
- в ряде случаев следует учитывать фазу менструального цикла, фармакодинамику лекарственных препаратов, циркадные ритмы.
Пациент должен находиться в спокойном состоянии не менее 15 минут: сидя или лежа. Наложение жгута (манжеты) не должно превышать 1 мин.
Преимущества иммуноферментного анализа по сравнению с другими методами определения антигенов и антител:
- высокая чувствительность (ИФА может обнаруживать одиночные молекулы анализируемого вещества);
- возможность использования минимальных объемов исследуемого материала;
- стабильность всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА при хранении;
- простота проведения реакции;
- возможность автоматизации всех этапов реакции;
- относительно низкая стоимость диагностических наборов.
- при наличии ревматоидного фактора в крови, который является антителом против собственных IgG;
- при различных системных заболеваниях;
- при нарушениях обменных процессов в организме;
- при приеме некоторых лекарственных препаратов;
- у новорожденных детей.
- Л. К. Решетникова. Иммунология. – Благовещенск, 2019. - 176 с.
- Гусякова О.А. Иммуноферментный анализ: учебное пособие для студентов лечебного, педиатрического, медико-профилактического факультетов, Самара: типография Клиник ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2010. - 32 с.
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Для корректной оценки результатов ваших анализов в динамике предпочтительно делать исследования в одной и той же лаборатории, так как в разных лабораториях для выполнения одноименных анализов могут применяться разные методы исследования и единицы измерения.
У вас остались вопросы? Запишитесь на прием к врачу в вашем городе по тел. 8 (495) 363-0-363; 8 (800) 200-363-0.
