Лактобактерии, определение ДНК (Lactobаcillus spp., DNA) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта

Синонимы: Урогенитальный соскоб на лактобактерии.

Lactobacillus spp., DNA, scraping of epithelial cells of urogenital tract.

Краткое описание исследования «Лактобактерии, определение ДНК в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта»

В настоящее время известно более 150 видов лактобацилл. В различных биотопах человека обитает около полутора-двух десятков видов. У женщин репродуктивного возраста нормофлора влагалища представлена преимущественно 5-6 видами Lactobacillus spp., которые составляют основу микробиоценоза. Данное исследование выявляет L. iners, L. crispatus, L. jensenii и L. gasseri – основные виды лактобактерий, колонизирующие влагалище, а также L. acidophilus, L. reuteri, L. delbrueckii, L. helveticus, L. fermentum, L. bulgaricus, L. casei, L. paracasei, L. rhamnosus, L. salivarius и L. johnsonii, применяемые в качестве пробиотиков.

Абсолютное количество лактобацилл может колебаться в достаточно широких пределах и требует количественной оценки. По данным разных авторов количество лактобацилл во влагалище здоровой женщины варьирует от 10^5 до 10^9 КОЕ/мл, что составляет от 90 до 99,9% всей микрофлоры влагалища.

Лактобактерии оказывают существенное влияние на процессы обмена веществ, обеспечивают организм человека витаминами группы В, С, К, никотиновой и фолиевой кислотами, биотином, вырабатывают аминокислоты, молочную, уксусную и другие органические кислоты, антибиотико- и гормоноподобные вещества, перекись водорода, L. fermentum № 90T-C4 продуцирует эндогенный лизоцим.

Выраженный дисбиоз влагалища – состояние микробиоценоза, характеризующееся значительным снижением доли лактобактерий (менее 20% от всех выделенных микроорганизмов) или полных их отсутствием. Выявление низкого содержания лактобактерий само по себе не является основанием для заключения о наличии какого-либо заболевания, ассоциированного с нарушением состава микрофлоры, однако указывает на его высокую вероятность и требует подтверждения, основанного на результатах анализа клинических данных и/или выявления условно-патогенных бактерий в концентрации, имеющей диагностическую значимость.

Аналитические показатели:

• определяемый фрагмент – специфичный участок ДНК Lactobacillus spp.;
• специфичность определения – 100%;
• чувствительность определения – 100 копий ДНК Lactobacillus spp. в образце.

В тесте также проводится определение содержания общей бактериальной массы (ОБМ) и контроля взятия материала (КВМ)- тест на содержание ДНК гена HMBS человека.

С какой целью определяют ДНК Lactobаcillus spp. в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта

Выявление ДНК Lactobаcillus spp. в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта используется для количественной оценки состояния нормофлоры у женщин репродуктивного возраста.

Литература

1. Баринов С. В. и др. Условно-патогенная микрофлора у больных с бактериальным вагинозом //Мать и дитя в Кузбассе. – 2019. – №. 1. – С. 42-48. 
2. Ивашечкин А. А. и др. Применение метода ПЦР в реальном времени для видовой идентификации G. vaginalis, A. vaginae и лактобактерий у женщин //Трудный пациент. – 2019. – Т. 17. – №. 10. – С. 43-47. 
3. Махова Т. И. и др. Ассоциация инфекций, передаваемых половым путем, и различных нарушений вагинальной микробиоты среди женщин репродуктивного возраста //Klinicheskaya Dermatologia I Venerologia. – 2020. – Т. 19. – №. 2. 
4. Махова Т. И. и др. Использование комплексного лабораторного анализа для дифференциальной диагностики бактериального вагиноза, аэробного вагинита и вульвовагинального кандидоза //Фундаментальная и клиническая медицина. – 2022. – Т. 7. – №. 2. – С. 29-37. 
5. Jakobsen R. R. et al. Characterization of the vaginal DNA virome in health and dysbiosis //Viruses. – 2020. – Т. 12. – №. 10. – С. 1143. 

Правила подготовки к исследованию «Лактобактерии, определение ДНК в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта»

Обследование женщин целесообразно проводить в первую половину менструального цикла, не ранее 5-го дня. Допустимо обследование во второй половине цикла, не позднее, чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации. При наличии выраженных симптомов воспаления, взятие материала проводится в день обращения. Накануне и в день обследования пациентке не рекомендуется выполнять спринцевание влагалища. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии (общей/местной) и во время менструации, ранее 24-48 часов после полового контакта, интравагинального УЗИ и кольпоскопии. Рекомендуется брать материал не ранее, чем через 14 дней после применения антибактериальных препаратов и местных антисептиков, и не ранее, чем через 1 месяц после применения антибиотиков перорально. Если для исследования берут соскоб из уретры, сбор материала проводят до или не ранее 2-3 часов после мочеиспускания.

С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения

Лактобактерии: результат выдается в абсолютных и относительных единицах.

Абсолютное значение – lg (десятичный логарифм) копии/проба. Референсные значения в норме не менее 5 lg копии/проба (не менее 10^5 копий ДНК Lactobacillus spp. в пробе).

Относительное значение – % содержания от общей бактериальной массы (ОБМ).

Референсные значения: в норме не менее 80% от общей бактериальной массы.

Трактовка результатов исследования «Лактобактерии, определение ДНК в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта»

Не обнаружено

В анализируемом образце биологического материала не найдено фрагментов ДНК, специфичных Lactobacillus spp. или концентрация в пробе ниже границы чувствительности теста.

ОБМ, общая бактериальная масса

Результат выдается в абсолютных единицах lg (десятичный логарифм) копии/проба. Референсные значения: в норме ОБМ не менее 5 lg копий/проба (не менее 10^5 копий ДНК ОБМ в пробе).

В случае, когда значение ОБМ ниже референсного, содержание бактериальной ДНК в образце недостаточно для количественного анализа, результат по Lactobacillus spp. выдается в виде «обнаружено» или «не обнаружено». В относительных единицах результат не подсчитывается.

Возможны как патологические, так и физиологические причины снижения ОБМ. Низкое содержание ОБМ, может быть связано с такими причинами, как антибиотикотерапия, возрастные изменения, гормональные нарушения и т.п. Поэтому даже при соблюдении всех преаналитических требований в качественно полученной пробе может присутствовать мало бактерий.

КВМ, контроль взятия материала

Количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце не менее 4 lg копий/проба (не менее 10^4 копий ДНК гена HMBS человека в пробе): достаточное для анализа количество биоматериала. Количество клеток человеческого эпителия в исследуемом образце менее 4 lg копий/проба: НЕ достаточное для анализа количество биоматериала. В этом случае невозможно точное количественное определение Lactobacillus spp. и ОБМ, а так же подсчет относительных значений Lactobacillus spp. в случае нормального содержания ОБМ. Если исключены физиологические и патологические причины сниженного количества эпителиальных клеток в образце – следует повторить анализ, начиная со стадии взятия материала.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.