Исследование мутационного статуса BCR-ABL гена (метод прямого секвенирования по Сэнгеру) BCR-ABL1 Mutation Analysis using direct Sanger sequencing, qualitative - узнать цены на анализ и сдать в Сухом Логу

Метод определения Прямое секвенирование по Сэнгеру.

Исследуемый материал Цельная кровь (с ЭДТА)

Одной из причин резистентности Ph-позитивных лейкозов (в первую очередь, хронического миелоидного лейкоза) к терапии ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) являются мутации киназного домена гена BCR-ABL. Появление данных мутаций связывают с общей геномной нестабильностью и накоплением генетических дефектов в опухолевых клетках вследствие усиления репликации ДНК и нарушения процессов ее репарации.

BCR-ABL-тирозинкиназа – белок с трехмерной пространственной структурой. Замена отдельных аминокислот киназного домена в результате мутаций гена BCR-ABL может менять структуру молекулы и снижать степень взаимодействия с ИТК, приводя к неэффективности терапии, селекции резистентных клонов и прогрессии заболевания.

Мутационный статус гена BCR-ABL целесообразно определять в дебюте, фазе акселерации и бластного криза хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ). Кроме того, наличие мутаций тирозинкиназного домена BCR-ABL рекомендуется исследовать при неудачной терапии и перед сменой ИТК.

К настоящему времени описано более 90 видов точечных мутаций BCR-ABL. В 85% случаев мутации представлены 15 наиболее часто встречающимися вариантами: T315I, Y253F/H, E255K/V, M351T, G250E, F359C/V, H396R/P, M244V, E355G, F317L, M237I, Q252H/R, D276G, L248V, F486S.

Мутации Р-петли (G250E, Y253F/H, Q255H/R) и А-петли (H396R, V379I, L387M) белка BCR-ABL обусловливают переход тирозинкиназы в активную конформацию, при которой с ней не может взаимодействовать иматиниб – ИТК первого поколения. Отсутствие ингибирующего действия иматиниба может быть следствием мутаций в специфических сайтах его связывания с тирозинкиназой (Y253F/H, T315I, F317L и др.). Мутации в зоне каталитического домена (M351T, E355G, F359V) приводят к аномально высокой тирозинкиназной активности.

Резистентность опухолевых клеток можно преодолеть применением ИТК второго поколения (нилотиниб, дазатиниб, бозутиниб), которые имеют отличную от иматиниба пространственную структуру и другие точки соединения с BCR-ABL-тирозинкиназой.

Исследования позволили выявить спектр резистентных к тем или иным ИТК мутаций посредством определения 50% максимальной ингибирующей концентрации. На основании этих данных и результатов клинических испытаний было сделано заключение о клинически значимых мутациях BCR-ABL. Установлено, что низкую чувствительность к нилотинибу обусловливают мутации Y253H, E255K/V, F359V, к дазатинибу – T315A, V299L, F317L/V/I/C, к бозутинибу – V299L, G250E, E255K/V. Терапия ИТК первого и второго поколения неэффективна при наличии мутации T315I.

Проведение исследования возможно при уровне относительной экспрессии гена BCR-ABL не менее 2%.

Методы генетической диагностики онкогематологических заболеваний

Литература

Туркина А.Г., Зарицкий А.Ю., Шуваев В.А. и др. Клинические рекомендации по диагностике и лечению хронического миелолейкоза. Клиническая онкогематология. 2017;10(3):294-316.
Челышева Е.Ю., Шухов О.А., Лазарева О.В., Туркина А.Г. Мутации киназного домена гена BCR-ABL при хроническом миелолейкозе. Клиническая онкогематология. 2012;5(1):13-21.
Baccarani M., Deininger M.W., Rosti G. et al. European Leukemia Net recommendations for the management of chronic myeloid leukemia. Blood. 2013;122(6):872-884.
Soverini S., Colarossi S., Gnani A. et al. Contribution of ABL Kinase Domain Mutations to Imatinib Resistance in Different Subsets of Philadelphia-Positive Patients: By the GIMEMA Working Party on Chronic Myeloid Leukemia. Clinical Cancer Research. 2006;12(24):7374-7379. doi: 10.1158/1078-0432.ccr-06-1516.
Soverini S., Hochhaus A., Nicolini F. et al. BCR-ABL kinase domain mutation analysis in chronic myeloid leukemia patients with tyrosine kinase inhibitors: recommendations from an expert panel on behalf of European Leukemia Net. Blood. 2011;118(18):1208-1213.

Нуклеотидная замена	Аминокислотная замена
Дикий тип	Дикий тип

Нуклеотидная замена	Аминокислотная замена
742C > G	L248V