Дифференцированное выявление ДНК Bordetella species: Bordetella pertussis (возбудитель коклюша) и Bordetella bronchiseptica (возбудитель бронхосептикоза) в соскобе эпителиальных клеток слизистой ротоглотки и/или носоглотки

Описание

Метод определения ПЦР с детекцией в режиме реального времени.

Исследуемый материал Соскоб эпителиальных клеток ротоглотки и/или носоглотки

Дифференцированное определение ДНК возбудителей коклюша (Bordetella pertussis ) и бронхосептикоза (Bordetella bronchiseptica) в соскобе эпителиальных клеток слизистой носоглотки и/или ротоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени, а также общего гена Bordetella species, включающего Bordetella parapertussis и другие виды рода Bordetella.

Диагностическая чувствительность и специфичность: 100%.

Коклюш – это острая воздушно-капельная инфекция, вызываемая микроорганизмами вида Bordetella pertussis, характеризуемая поражением слизистой оболочки преимущественно гортани, трахеи, бронхов и развитием судорожного приступообразного кашля.

Коклюш относят к детским инфекциям, однако в возрастной структуре в последние годы преобладают подростки и взрослые, которые в большинстве случаев переносят коклюш в атипичной форме. У грудных невакцинированных детей коклюш протекает очень тяжело и представляет прямую угрозу для жизни.

Входными воротами инфекции служит слизистая оболочка респираторного тракта. Палочки коклюша проявляют строгий тропизм к клеткам мерцательного эпителия, прикрепляются к ним и размножаются на поверхности слизистой оболочки, не проникая в кровоток. Размножение обычно происходит на протяжении 2-3 недель и сопровождается выделением ряда сильных экзотоксинов, основными из них являются КТ (коклюшный токсин) и аденилатциклаза, которые способствуют развитию патологического процесса (воспаление, увеличение секреции слизи, появление изъязвлений эпителия дыхательных путей, очаговый некроз).

Коклюш относится к числу заболеваний с циклическим течением. Выделяют четыре последовательных периода: инкубационный, продолжительность которого составляет 3-14 дней (в среднем 7-8 дней); катаральный, или предсудорожный (10-13 дней); судорожный, или спазматический (1-1,5 недели у иммунизированных детей и до 4-6 недель у непривитых), период реконвалесценции (ранний – развивающийся через 2-8 недель от начала клинических проявлений и поздний – спустя 2-6 месяцев).

Заболевание продолжается минимум две недели без явлений интоксикации и повышения температуры тела, протекает с приступообразным кашлем, усиливающимся ночью и по утрам. Кашель сопровождается покраснением лица, шумными вдохами (репризами), которые заканчиваются отхождением вязкой слизи или рвотой в конце приступа.

Bordetella bronchiseptica – возбудитель бронхосептикоза – поражает главным образом домашних животных, а также людей, инфицирующихся при контакте с больными животными. Бронхосептикоз у людей протекает в виде ОРЗ с приступами сухого кашля, особенно перед сном.

Лабораторная диагностика коклюша и коклюшеподобных заболеваний приобретает особую значимость в связи с трудностью клинического распознавания и в настоящее время является важным звеном в системе противоэпидемических мероприятий.

Бактериологический метод является «золотым стандартом» лабораторной диагностики, позволяет выделить культуру возбудителя на питательной среде и идентифицировать возбудителя до вида. Но успешен он только в ранние сроки заболевания – первые 2 недели.

Серодиагностика (выявление противококлюшных антител) может быть применена на более поздних сроках, начиная со 2-й недели заболевания. При наличии типичных клинических проявлений она позволяет лишь подтвердить диагноз, в то время как при стертых и атипичных формах серодиагностика может оказаться решающей в выявлении заболевания.

ПЦР является высокочувствительным, специфичным и быстрым методом, который может быть использован в разные сроки заболевания даже на фоне приема антибиотиков при выявлении атипичных и стертых форм коклюша. Наиболее информативным считается период 1-4 недели от начала заболевания. Наличие в анамнезе вакцинации против коклюша не влияет на результаты ПЦР.

Литература

МР 3.1.2.0072-13. Диагностика коклюша и паракоклюша.
Николаева И.В., Шайхиева Г.С. Коклюш на современном этапе. Вестник современной клинической медицины. 2016;9(2):25-29. DOI: 10.20969/VSKM. 2016;9(2):25-29.
Прадед М.Н., Яцышина С.Б., Селезнева Т.С., Малинина С.В., Бирюлева Н.В., Любимова Т.Е., Воробьева Н.С. ПЦР-диагностика инфекций, вызванных B. pertussis, B. parapertussis и B. bronchiseptica. Клиническая лабораторная диагностика. 2013;(1):53-56.
Тюкавкина С.Ю., Харсеева Г.Г. Коклюш: эпидемиология, биологические свойства Bordetella pertussis, принципы лабораторной диагностики и специфической профилактики. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2014;19(4):50-60.
Инструкция по применению набора реагентов для выявления ДНК Bordetella species с дифференциацией видов Bordetella pertussis и Bordetella bronchiseptica методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени АО «Вектор-Бест».
Методические указания МУК 4.2.3701-21 «Лабораторная диагностика коклюша и заболеваний, обусловленных другими бордетеллами».
Коклюш у детей. Клинические рекомендации. Одобрены Научно-практическим советом Минздрава России, 2019.

Подготовка

Взятие материала желательно проводить до диагностических и лечебных манипуляций в предполагаемом месте локализации возбудителя.

При подготовке пациента к процедуре следует учесть:

за 6 часов до исследования не рекомендуется использовать лекарственные средства для орошения ротоглотки и препараты для рассасывания;
непосредственно перед взятием биологического материала не рекомендуется использовать жевательную резинку/пастилки для освежения дыхания;
непосредственно перед взятием биоматериала прополоскать полость рта питьевой водой комнатной температуры;
если полость носа заполнена слизью, перед процедурой рекомендуется провести высмаркивание.

Желательно соблюдать все описанные условия, если лечащим врачом не рекомендовано иное.

Показания к назначению

для лабораторного подтверждения заболевания коклюшем и бронхосептикозом;
при приступообразном кашле продолжительностью более 5-7 дней у детей;
по эпидемиологическим показаниям (лицам, бывшим в контакте с больными коклюшем).

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения:

Тест качественный, включает суммарный ответ по Bordetella species и отдельно по Bordetella pertussis и Bordetella bronchiseptica

Референсные значения: нет.

Форма представления результата

Результат выдается в терминах «обнаружено» или «не обнаружено»

Трактовка результатов исследования

Обнаружено:

В анализируемом образце биологического материала обнаружены фрагменты ДНК специфичные для Bordetella species и Bordetella pertussis
В анализируемом образце биологического материала обнаружены фрагменты ДНК специфичные для Bordetella species и Bordetella bronchiseptica
В анализируемом образце биологического материала обнаружены фрагменты ДНК специфичные для Bordetella species

Инфекция, вызванная соответствующим возбудителем.

Носительство возбудителя инфекции.

Не обнаружено

В анализируемом образце биологического материала не обнаружено фрагментов ДНК, специфичных для Bordetella species/Bordetella pertussis/Bordetella bronchiseptica

Отсутствие ДНК возбудителя в исследуемом материале.

Уровень ДНК возбудителя в исследуемом материале ниже границы чувствительности тест-системы

Результат «не обнаружено» по видам Bordetella pertussis и Bordetella bronchiseptica, но «обнаружено» по Bordetella species свидетельствует, что в пробе присутствует ДНК других видов из рода Bordetella (исключая Bordetella pertussis и Bordetella bronchiseptica).

Определяемые виды Bordetella species :

Bordetella avium, Bordetella bronchialis, Bordetella bronchiseptica, Bordetella flabilis, Bordetella hinzii, Bordetella holmesii, Bordetella muralis, Bordetella parapertussis, Bordetella pertussis, Bordetella petrii, Bordetella pseudohinzii, Bordetella sputigena, Bordetella trematum, Bordetella tumbae, Bordetella tumulicola)

Литература

Что еще заказывают с этим анализом