Иммуногистохимический скрининг рака шейки матки – исследование двух маркеров для ранней диагностики дисплазии с высокой степенью риска озлокачествления: p16INK4a + Ki-67

Метод определения

Гистологическое исследование биоптатов шейки матки согласно гистологической классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) с окрашиванием гематоксилином-эозином. ИГХ-исследование индекса пролиферативной активности с применением моноклональных антител к Ki-67 (MIB-1) и белку p16^INK4a(пероксидазный и авидин-биотиновый методы).

Исследуемый материал Биоптат опухоли, фиксированный в парафиновом блоке

Комплексное исследование биоптатов шейки матки, включающее морфологическое описание и гистохимическую оценку экспрессии p16^INK4a для уточнения биологического потенциала диспластических изменений в эпителии шейки матки.

Рак шейки матки

является превалирующим среди онкологических заболеваний у женщин и остается одной из важных медицинских и социальных проблем в экономически развитых странах. Ежегодная статистика первичной выявляемости рака шейки матки составляет 10-12 случаев на 100 тысяч женщин. От стадии и распространенности опухоли на момент выявления зависят возможности терапии и прогноз выживаемости.

Своевременное распознавание и корректное лечение предраковых процессов шейки матки имеют существенное значение в связи с локальным характером прединвазивной и микроинвазивной стадий рака шейки матки. Удаление опухоли в таких случаях приводит не только к полному выздоровлению больных в ряде случаев, но и к репродуктивной, психоэмоциональной и социальной реабилитации женщин. Проведение органосохраняющего лечения рака шейки матки является новым направлением в современной онкогинекологии.

В настоящее время доказано, что основным этиологическим фактором в индуцировании и развитии рака шейки матки является вирус папилломы человека (ВПЧ). Однократное выявление ВПЧ в эпителии шейки матки недостаточно информативно. Подавляющее большинство ВПЧ-инфекций являются скоротечными и существенно не влияют на механизмы роста эпителиальных клеток, организм способен избавиться от ВПЧ-инфекции в течение 6-12 месяцев. Однако небольшая доля инфицирования определенными типами ВПЧ может сохраняться и в отсутствие лечения приводить к малигнизации процесса. Патологический процесс протекает бессимптомно. В результате интеграции ВПЧ в геном эпителиальных клеток, в ядрах клеток происходит репликация вирусных онкобелков Е6 и Е7, которые могут вызвать неопластическую трансформацию с нарушением регуляции клеточного цикла.

Белок p16^INK4a представляет собой ингибитор циклин-зависимых киназ и играет важную роль в регуляции клеточного цикла эукариот. Этот белок участвует в опосредованном через белок ретинобластомы (pRB) контроле перехода клетки из фазы G1 в фазу S, он подавляет опухолевый рост; повышенная экспрессия p16^INK4a может запускать остановку цикла клеточного деления. Многие виды опухолей характеризуются инактивацией гена p16INK4a, что приводит к нарушению регуляции клеточного цикла и бесконтрольной пролиферации клеток. Но в опухолях, связанных с трансформирующим действием ВПЧ, отмечается увеличение экспрессии данного белка. Экспрессия белка p16^INK4a реактивно увеличивается при росте количества вирусных онкобелков ВПЧ Е6 и Е7. При этом повышение экспрессии p16^INK4a оказывается неэффективным для регуляции клеточного цикла, поскольку онкобелки ВПЧ действуют на уровне белка ретинобластомы. Повышение экспрессии p16^INK4a применительно к этому виду опухолей рассматривают как косвенный признак интеграции ВПЧ высокого риска в геном и трансформации эпителиальных клеток под действием ВПЧ.

Антиген Кi-67, впервые описанный Gerdes и соав. в 1983 г., состоит из 2 полипептидных цепей с молекулярной массой 345 и 395 кДа. Это основная часть нуклеарного матрикса в интерфазе, ассоциирующаяся с хромосомами фазы митоза. Ki-67 является димерной молекулой, имеющей тесную связь с 10-й хромосомой, но конкретная роль этого протеина в процессе клеточного деления до сих пор неизвестна. Экспрессия Кi-67 позволяет выделить опухолевые клетки, находящиеся в активной фазе клеточного цикла на всем его протяжении (G1-, S-, G2- и M-фазы), кроме G0-периода.

Пролиферативная активность опухолевых клеток представляет собой «фракцию роста» новообразования и является ведущим фактором как в механизме злокачественной трансформации клеток, так и в биологическом поведении уже возникших опухолей. Пролиферативная активность опухоли − одна из наиболее важных характеристик ее фенотипа, в значительной степени определяющая скорость роста новообразования, способность его к метастазированию, к ответу на лечебные мероприятия и исход онкологического заболевания. Многие факторы, влияющие на течение и исход онкологических заболеваний, свое патогенетическое действие на опухоль опосредуют через изменение пролиферативной активности.

Гистологическая диагностика интраэпителиальной цервикальной неоплазии (CIN) исторически основывалась только на морфологической оценке метаплазированного эпителия и определении цитопатического воздействия ВПЧ. Рутинные гистологические методы не лишены субъективности оценки и иногда приводят к ложно-положительным или ложно-отрицательным диагнозам, что значительно сказывается на тактике прогноза и ведения пациентов. ИГХ-определение индекса пролиферации при исследовании экспрессии Ki-67 (MIB-1) является необходимым рутинным исследованием при любой онкопатологии. При дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80–100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки иммуногистохимически определяется усиленная экспрессия белка p16^INK4a. ИГХ-определение экспрессии белка p16^INK4a, в сопоставлении с индексом пролиферативной активности (экспрессия Ki-67), является одним из важных критериев для дифференциального диагноза дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II и III) и начальных форм рака шейки матки (Аdenocarcinoma in situ, микроинвазивная аденокарцинома).

Литература

Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии./Я.В. Бохман. – С.-Пб. «Фолиант». 2002.
Двойрин В.В., Аксель М.Е., Трапезников Н.Н. Статистика злокачественных новообразований в России и некоторых странах СНГ в 1990-1994 гг. – М. 1995.
Иглесиас-Кортит Л., Иглесиас-Гью Дж. Репродуктивное здоровье, в 2-х томах, т. 2. Редкие инфекции: Пер. с англ./Под ред. Л. Кейта, Г. Бергера, Д. Эдельмана. – М. 1998:390-402.
Киселев Ф.Л. Вопросы вирусологии. 1997;6:248-251.
Киселев Ф.Л., Павлиш О.А., Татосян А.Г. Молекулярные основы канцерогенеза у человека. – М. 1990.
Краснопольский В.И. Патология влагалища и шейки матки. – М. «Медицина». 2009:272.
Сагайдак В.Н., Комарова Л.Е. Рак шейки матки и цитологический скрининг. – М. 1994.
Серебров А.И. Рак матки. – Л. 1957.
Сирйонен К. Репродуктивное здоровье, в 2-х томах, т. 2. Редкие инфекции: Пер. с англ./Под ред. Л. Кейта, Г. Бергера, Д. Эдельмана. – М. 1998:169-189.
Хмельницкий О.К. Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний. – СПб. 1994.
Barnes W., Delgado G., Kurman R. et al. Gynecologic Oncology. 1988;29:267-273.
Chen T., Chen A., Hsieh C. et al. Oncogene. 1993;8:1511-1518.
De Villiers E.M. Human pathogenic papillomavirus types: an update./Ed. H. zur Hausen. Human pathogenic papillomaviruses, topics in microbiology and immunology. – Berlin. 1994;186:1-13.
Ikenberg H. International Journal of Cancer. 1994;59:322-326.
Lorincz A., Reid R., Jenson A. et al Obstetrics & Gynecology. 1992;79:328-337.
Matlashewski G. Anticancer Res. 1989;9:1447-1456.
Mukherjee B., Sengupta S., Shaudhuri S. et al. International Journal of Cancer. 1994;59:476-482.
Van den Brule A., Snijders P., Meier C. et al. Papillomavirus report. 1993;4(4):95-99.
Zur Hausen H. Curr. Topics Microbiol. Immunol. 1977;78:1.
Zur Hausen H. Virology. 1991;184:9-13.
Zur Hausen H. Human pathogenic papillomaviruses, topics in microbiology and immunology./Еd. H. zur Hausen. – Berlin. 1994;186:131-157.
Zur Hausen H., Gissman L. Viral Oncology./Ed. G. Klein. – New York. 1980:433.
Zur Hausen H., Schneider A./Еd. P.M. Howley, N.P. Salzman. The papovaviride. Vol.2. The papillomaviruses. Plenum. – New York. 1987.