Энтеровирусы, определение РНК в спинномозговой жидкости (Enterovirus, RNA)

Метод определения ПЦР в реальном времени (RT-PCR).

Исследуемый материал Спинномозговая жидкость

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Синонимы: Определение РНК энтеровирусов в ликворе; Анализ ликвора на РНК энтеровирусов.

Еnteroviruses, determination of RNA in cerebrospinal fluid; Еnteroviruses, RNA, cerebrospinal fluid.

Краткое описание исследования «Энтеровирусы, определение РНК в спинномозговой жидкости»

Энтеровирусы – род РНК-содержащих вирусов, который относится к семейству пикорнавирусов (Picornaviridae). Энтеровирусной инфекции (ЭВИ) подвержены лица всех возрастов, но наиболее восприимчивы к ней дети. Эта инфекция часто может оставаться нераспознанной, поскольку в большинстве случаев протекает бессимптомно (у 85% инфицированных лиц) либо в легкой или среднетяжелой форме, напоминающей обычную простуду (в 12-14% случаев). Тяжелое течение заболевания (спектр клинических форм см. ниже) отмечают у 1-3% инфицированных. Потребность в лабораторном подтверждении энтеровирусной инфекции для отличия от других видов патологии возникает при тяжелых формах заболевания (в том числе менингитах, энцефалитах) или при эпидемических вспышках инфекции.

Среди энтеровирусов выделяют различные виды и серотипы. Заболеваемость, связанная с полиомиелитными энтеровирусами (полиовирусами), во многих странах, включая Россию, практически ликвидирована благодаря эффективной вакцинации. Среди неполиомиелитных энтеровирусов потенциальную опасность для человека представляют семьдесят серотипов.

Данный тест позволяет выявить РНК энтеровирусов человека (Human enterovirus) видов/кластеров А, В, С, D (Human coxsackievirus A, Human coxsackievirus В, Human echovirus, Human poliovirus, Human enterovirus 68-71, 73-78, 89-91).

Пик заболеваемости, связанной с энтеровирусами, приходится на лето и осень. Основные механизмы передачи энтеровирусов  фекально-оральный (посредством загрязненных рук и предметов) и воздушно-капельный. Возможно заражение водным и пищевым путем, а также трансплацентарная передача инфекции.

Инкубационный период при энтеровирусной инфекции продолжается от 2 до 14 (в среднем 7) суток. После заражения вирусы обнаруживаются в верхних дыхательных путях до трех недель, в желудочно-кишечном тракте — до восьми недель. На протяжении этого периода инфицированные могут выделять их в окружающую среду. Пациенты наиболее заразны в конце инкубационного периода и в начале заболевания.

Вирусы первоначально реплицируются в клетках верхних дыхательных путей и дистальном отделе тонкой кишки, в подслизистой и лимфатической ткани. Затем они с кровотоком (первичная виремия) распространяются по тканям и органам. Энтеровирусы можно обнаружить в секретах дыхательных путей и фекалиях инфицированных лиц, иногда – в крови и спинномозговой жидкости. Поражение органов-мишеней происходит после вторичной виремии.

Особенности энтеровирусной инфекции и формы заболевания

Особенностью энтеровирусной инфекции является то, что различные клинические формы заболевания могут быть обусловлены представителями одного серотипа, а сходные клинические проявления могут вызывать разные серотипы вирусов. Лишь для некоторых серотипов энтеровирусов характерен определенный комплекс симптомов, который не наблюдается при инфицировании другими разновидностями. Многие из возможных клинических проявлений не являются специфичными для энтеровирусной инфекции и встречаются при других инфекционных заболеваниях.

Заболевания, вызываемые энтеровирусами, можно разделить на две группы.

Менее опасные формы заболевания: трехдневная лихорадка с сыпью или без, герпангина, плевродиния, везикулярный фарингит, конъюнктивит, увеит, гастроэнтерит.

Потенциально тяжелые формы заболевания: менингит, энцефалит, острый паралич, септикоподобные состояния у новорожденных, миокардит, перикардит, гепатит, хронические инфекции у лиц с иммунодефицитами.

Методы лабораторной диагностики и виды биоматериала

Основные методы лабораторной диагностики энтеровирусной инфекции – обнаружение РНК энтеровирусов методом ПЦР и выделение энтеровирусов в культуре клеток. По сравнению с методом выделения и идентификации вируса с применением культуры клеток, ПЦР-исследование обладает большей чувствительностью и требует меньших временных затрат.

Согласно СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней», больные ЭВИ и лица с подозрением на это заболевание подлежат лабораторному обследованию. Взятие клинического материала от больного организуется при установлении диагноза ЭВИ или при подозрении на это заболевание  в день его обращения.

Взятие определенного вида материала для лабораторных исследований от больных ЭВИ и лиц с подозрением на это заболевание осуществляется с учетом клинической картины заболевания.

Для исследования отбираются:

стерильные типы клинического материала: цереброспинальная жидкость, отделяемое конъюнктивы, отделяемое везикул, кровь, биоптаты органов;
нестерильные типы клинического материала: мазки из ротоглотки/носоглотки, отделяемое язв (афт) при везикулезном (афтозном) фарингите, образцы фекалий.

Аналитическая чувствительность (фекалии): 5х10³ ГЭ/мл.

Диагностическая чувствительность (с доверительной вероятностью 95%): 99,4-100%.

Диагностическая специфичность (с доверительной вероятностью 95%): 99,3-100%.

С какой целью определяют РНК энтеровирусов в спинномозговой жидкости

Исследование выполняют с целью лабораторного подтверждения энтеровирусной инфекции.

Литература

Ботвиньева В. В. и др. Современные возможности диагностики, профилактики и лечения энтеровирусной инфекции Коксаки у детей //Педиатрическая фармакология. – 2012. – Т. 9. – №. 3.
Айхенфилд Л., Марри Д. Инфекционные болезни у детей. – 2006.
Ежлова Е. Б., Чернявская О. П., Михайлов М. И. Эпидемио логический надзор и профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции. Методические указания 3.1. 1.2363-08 //Москва. – 2008. – Т. 8.
Kupila L. et al. Diagnosis of enteroviral meningitis by use of polymerase chain reaction of cerebrospinal fluid, stool, and serum specimens //Clinical infectious diseases. – 2005. – Т. 40. – №. 7. – С. 982-987.
Материалы фирмы-производителя реагентов.

Правила подготовки к исследованию на Энтеровирусы, определение РНК в спинномозговой жидкости

Взятие СМЖ проводится в первые дни болезни при наличии клинических показаний, в условиях стационара, с использованием одноразовых пункционных игл в одноразовые пластиковые сухие пробирки в количестве не менее 1,0 мл.

Трактовка результатов исследования на Энтеровирусы, определение РНК в спинномозговой жидкости

«Обнаружено»

Энтеровирусная инфекция (до одного месяца от начала заболевания).
Носительство энтеровирусов.

«Не обнаружено»

Отсутствие РНК энтеровирусов в исследуемом материале.
Концентрация РНК энтеровирусов в исследуемом материале ниже предела детекции.