Выявление генов резистентности к гликопептидным и бета-лактамным антибиотикам у бактерий методом ПЦР, тест-система БакРезиста. (BakResista. Detection of conditionally pathogenic microorganisms by PCR in real time)

Синонимы: Antibiotic resistance genes (ARGs), antimicrobal resistance, DNA, Real-time PCR, RT-PCR.

Краткое описание исследования «Антибиотикорезистентность»

В последние десятилетия в России, как и во всем мире, отмечается стремительное распространение устойчивости возбудителей инфекционных заболеваний более чем к трем антибактериальным препаратам (АБП) либо ко всем АБП. Развитие лекарственной резистентности приводит к появлению способности микроорганизмов сохранять свою жизнедеятельность, несмотря на применение этиотропной терапии. Устойчивость к АБП препятствует эффективному лечению пациентов, способствует формированию хронических, рецидивирующих инфекций. В наибольшей степени проблема резистентности к АБП актуальна для стационаров, так как способствует развитию нозокомиальных (внутрибольничных) инфекций, но в последнее время она становится все более значимой и в амбулаторно-поликлинической практике.

К основным причинам, способствующим развитию антибиотикорезистентности микроорганизмов, относят следующие:

• нерациональное использование АБП;
• необоснованное назначение для лечения вирусных и легких бактериальных инфекций;
• применение АБП широкого спектра в ситуациях, когда могут эффективно использоваться АБП с узким спектром действия;
• назначение антибактериальных препаратов без учета спектра возбудителей и их чувствительности;
• неадекватный режим дозирования (недостаточные дозы, нарушение кратности введения и длительности приема);
• низкий уровень инфекционного контроля (нарушения в его организации и проведении);
• широкое использование АБП в пищевой и парфюмерной промышленности, в сельском хозяйстве и ветеринарии;
• неправильный выбор эмпирической антимикробной терапии;
• свободная безрецептурная продажа АБП в аптечной сети.

Для выявления антибиотикорезистентности существуют фенотипические (традиционные) и молекулярно-генетические методы. Молекулярно-генетические методы исследования антибиотикорезистентности характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью, быстротой получения результатов, стандартизованностью и технологичностью исследования.

Резистентность микроорганизмов может быть природной и приобретенной, но ее формирование во всех случаях обусловлено генетически. При этом гены антибиотикорезистентности зачастую локализованы на мобильных генетических элементах и способны к быстрому распространению как внутри одного вида, так и между разными видами бактерий.

Рисунок 1. Брошюра производителя тест-системы ООО «ДНК-Технология», версия 114-2.

Аналитические показатели

• диагностическая специфичность теста (95% ДИ) – 100% (99,8-100%);
• диагностическая чувствительность теста (95% ДИ) – 100% (98,7-100%);
• предел обнаружения для генов резистентности –2,0 х 10^3 копий/мл препарата ДНК.

Клиническая значимость исследования «Антибиотикорезистентность»

• Устойчивость к антибиотикам является одной из основных проблем современного здравоохранения во всем мире.
• Учитывая высокий уровень антибиотикорезистентности и широкое распространение штаммов, продуцирующих карбапенемазы, становится актуальным быстрое получение результатов.
• ПЦР-диагностика — прямой метод, который позволяет проводить определение генов антибиотикорезистентости у труднокультивируемых микроорганизмов.
• На сегодняшний день в соответствии с Приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации № 804н от 7 ноября 2017 г. «Об утверждении номенклатуры медицинских услуг» (вступил в силу с 1 января 2018 г.) молекулярно-генетические исследования введены в качестве базового диагностического метода в случаях выявления генов бета-лактамаз, карбапенемаз и генов резистентности к гликопептидам.

С какой целью выполняют исследование «Антибиотикорезистентность»

Исследование выполняют с целью определения генов резистентности к гликопептидным и бета-лактамным антибиотикам у бактерий.

Что может повлиять на результат исследования «Антибиотикорезистентность»

Нарушение правил подготовки может повлиять на результат исследования.

Материал для исследования

Соскобы эпителиальных клеток урогенитального тракта (вагинальный, цервикальный, уретральный).

Соскоб эпителиальных клеток ротоглотки.

Моча.

Мокрота, смывы, лаважная жидкость.

Внимание! Стоимость исследования указана для одной локализации.

Литература

1. Кафтырева Л. А. и др. Принципы организации мониторирования устойчивости ведущих возбудителей инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи, к антимикробным препаратам в лечебно-профилактических медицинских организациях здравоохранения. Федеральные клинические рекомендации //Федеральные клинические рекомендации.—2014.—36 с. – 2014.
2. Рубцова М. Ю. и др. Мультипараметрическое определение генов и точечных мутаций в них для идентификации бета-лактамаз //Успехи биологической химии. – 2010. – Т. 50. – С. 303-348.
3. Abebe E., Tegegne B. and Tibebu S. A Review on molecular mechanisms of bacterial resistance to antibiotics // European Journal of Applied Sciences. — 2016. — Vol. 8. — No. 5. — P. 301–310.
4. Evans B. A., Amyes S. G. OXA-beta-lactamases // Clin Microbiol Rev. — 2014. — Vol. 27. — P. 2. — P. 241–263.
5. Материалы фирмы-производителя реагентов.

Правила подготовки к исследованию «Антибиотикорезистентность»

Обследование женщин целесообразно проводить в первую половину менструального цикла, не ранее 5-го дня. Допустимо обследование во второй половине цикла, не позднее, чем за 5 дней до предполагаемого начала менструации. При наличии выраженных симптомов воспаления, взятие материала проводится в день обращения. Накануне и в день обследования пациентке не рекомендуется выполнять спринцевание влагалища. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии (общей/местной) и во время месячных, ранее 24-48 часов после полового контакта, интравагинального УЗИ и кольпоскопии.

И для мужчин, и для женщин, рекомендуется брать материал не ранее, чем через 14 дней после применения антибактериальных препаратов и местных антисептиков, и не ранее, чем через один месяц после применения антибиотиков перорально. Если для исследования берут соскоб из уретры, сбор материала проводят до или не ранее 2-3 часов после мочеиспускания.

Взятие материала желательно проводить до диагностических и лечебных манипуляций в предполагаемом месте локализации возбудителя.

Взятие биологического материала рекомендуется проводить до начала применения лекарственных препаратов (антибактериальных, противовирусных, противопаразитарных). При проведении исследований в целях контроля лечения целесообразно проводить взятие проб на ПЦР-тесты не ранее, чем через 10-14 дней после окончания применения соответствующих препаратов локального действия и не ранее, чем через один месяц после проведения системной терапии.

При подготовке пациента к процедуре следует учесть:

• за 6 часов до исследования не рекомендуется использовать лекарственные средства для орошения ротоглотки и препараты для рассасывания;
• перед проведением исследования не чистить зубы, не использовать жевательную резинку/пастилки для освежения дыхания;

Желательно соблюдать все описанные условия, если лечащим врачом не рекомендовано иное.

Следует собирать первую утреннюю порцию мочи в количестве 20-30 мл в стерильный флакон. Не рекомендуется взятие биоматериала на фоне проведения антибактериальной терапии. См. инструкцию.

С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: Lg концентрации на образец (биоматериал в пробирке с транспортной средой).

Форма представления результатов

Полуколичественный результат по каждому выявляемому показателю в логарифмах с комментарием (описание результатов).

Трактовка результатов исследования «Антибиотикорезистентность»

Сравнивая значения логарифмов, возможно провести полуколичественную оценку:

• доли резистентных микроорганизмов от общего количества бактериальной массы;
• соотношения генов резистентности друг с другом.